引物與qPCR檢測有什么關系?

引物在qPCR有什么關系?

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發表時間:2024-03-11 14:29

引物與qPCR有什么關系?

引物在實時定量聚合酶鏈反應(quantitative PCR,qPCR)中扮演著重要的角色。引物的設計質量直接影響著實驗的準確性和可靠性。

本文將探討引物在 qPCR 檢測中的意義,并介紹如何設計和選擇可靠的引物。


引物的作用

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Minerva Biolabs

特異性檢測:

引物的主要作用是在DNA的特定區域結合并擴增目標序列。良好設計的引物對于特異性至關重要,確保只擴增目標DNA,而不受其他非特定序列的影響。

靈敏度:

引物的選擇直接影響著 qPCR 檢測的靈敏度。優秀的引物設計可以保證低濃度的目標DNA也能被可靠地擴增和檢測,從而提高實驗的靈敏度。

準確性:

正確選擇的引物可以減少假陽性和假陰性結果的風險,確保實驗結果的準確性和可靠性。

效率:

引物的設計還會影響擴增的效率,良好設計的引物能夠在合適的溫度下快速擴增目標序列,提高實驗效率。


引物設計原則

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長度

引物的長度通常在18到25個核苷酸之間,過長或過短的引物都可能影響擴增效率和特異性。


GC含量

引物的GC含量應在40%到60%之間,過高或過低的GC含量會影響引物的穩定性和特異性。


特異性

引物設計時要確保與非靶標DNA的亞基序列不匹配,通常通過使用生物信息學工具進行引物特異性檢測。


避免二聚體和結構性問題

引物設計時需要避免引物之間和引物與模板DNA之間的二聚體形成,同時也要避免引物自身的結構性問題。


避免SNP影響如果目標區域存在單核苷酸多態性(SNP),要確保引物與目標DNA序列的匹配性不受SNP影響。


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引物的設計和選擇是 qPCR 實驗中至關重要的一環,直接關系到實驗結果的準確性和可靠性。在進支原體qPCR檢測過程中,引物的選擇也十分重要。德國MB支原體檢測試劑盒Venor?GeM qEP,預混液中包含引物,幫助支原體檢測項目完成方法學驗證。

Venor?GeM qEP

Venor?GeM qEP利用定量、實時PCR (qPCR)快速(約3小時)和可靠的篩選細胞培養上清支原體污染。該試劑盒可與多種類型的實時PCR循環器結合使用,能夠檢測熒光染料FAM?和HEX?。

產品特點

德國MB公司生產的支原體qPCR檢測試劑盒有以下優點:

①經典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體),根據序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單,易于觀察(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽性,其他微生物或真核細胞均為陰性,無交叉反應)。

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高靈敏度,MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒經典法檢測限可達到≤10CFU/ml。

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MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒一步法最低檢測限≥50個基因組/反應。

④MB公司有相應配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標準品,便于方法學驗證。

⑤MB公司有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA,便于特異性驗證。

⑥MB公司有相應配套的支原體絕對定量標準品,便于最后定量檢測。

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