實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的原理是什么

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的原理主要基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。PCR是一種體外擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)，通過(guò)高溫變性、低溫退火和適溫延伸的循環(huán)過(guò)程，使得目的基因片段得以迅速擴(kuò)增。

在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，特定的熒光基團(tuán)被加入到PCR反應(yīng)體系中，這些熒光基團(tuán)可以是熒光染料或是與特定序列結(jié)合的熒光探針。隨著PCR循環(huán)的進(jìn)行，熒光基團(tuán)與目標(biāo)DNA的結(jié)合量也隨之增加，從而發(fā)出熒光信號(hào)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀內(nèi)部的光源和光學(xué)系統(tǒng)能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)這些熒光信號(hào)，并將信號(hào)強(qiáng)度轉(zhuǎn)化為可以讀取和記錄的數(shù)據(jù)。

在PCR反應(yīng)的早期階段，熒光信號(hào)主要來(lái)自于背景熒光和非特異性擴(kuò)增，因此在這個(gè)階段，熒光信號(hào)的變化并不明顯。然而，當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)期時(shí)，目的基因片段的擴(kuò)增量呈指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)，熒光信號(hào)也隨之急劇上升。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)這一變化，并通過(guò)軟件分析，繪制出熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR循環(huán)數(shù)之間的關(guān)系曲線。

通過(guò)對(duì)比已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以準(zhǔn)確地計(jì)算出待測(cè)樣本中目的基因的初始拷貝數(shù)。這種定量方法具有高度的靈敏度和準(zhǔn)確性，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的精確測(cè)量和比較分析。

總之，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的原理是通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)過(guò)程中的熒光信號(hào)變化，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線分析，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)基因的準(zhǔn)確定量檢測(cè)。