在細胞培養過程中如何去除支原體

在細胞培養過程中，去除支原體污染是一個重要的問題。以下是幾種常用的去除支原體污染的方法：

抗生素處理：選擇對支原體有抑制活性的抗生素，如四環素類和大環內酯類。這些抗生素能有效地殺滅支原體，但應注意避免使用對支原體無效或耐藥的藥物，如內酰胺類和萬古霉素等。

清洗純化法：通過細胞營養馴化、優質細胞群的篩選、細胞清洗以及反復離心洗滌等步驟，利用離心力、細胞、微生物質量和懸液的浮力差來清除支原體。這種方法可以顯著降低支原體數量，特別是在結合敏感抗生素使用時，效果更佳。

MRA處理：使用Mycoplasma Removal Agent（MRA）處理細胞，每4天換一次液，連續處理15天以確保細胞純潔健康。這種方法效果良好，且操作簡單。

藥物輔助加溫處理：先用藥物處理污染的組織培養物，然后將其置于41℃培養4-5小時（最長不超過18小時）。這種方法可以殺死支原體，但對細胞也有一定的不良影響，因此需要謹慎使用。

動物體內接種除菌法：把受支原體污染的腫瘤細胞接種在同種動物皮下或腹腔中，借動物免疫系統消滅支原體。待一定時間后，從體內取出細胞再進行培養繁殖。

巨噬細胞吞噬法：從動物腹腔采取巨噬細胞，加入被支原體污染的細胞培養液中混合培養。在培養過程中，可利用支持物培養法驗證支原體是否已被消除干凈。

需要注意的是，對于非重要的細胞，如培養中的細胞或WCB的細胞等，可以將培養物與用過的培養基滅活后丟棄。但對于較為重要的細胞，如來源珍貴或實驗室中細胞保藏量較小的細胞，應優先考慮使用上述方法來清除支原體污染。

另外，為了避免支原體污染的發生，細胞培養過程中應注意操作規范，保持實驗室環境的清潔和無菌。同時，定期對培養物和培養基進行檢測，一旦發現支原體污染，應立即采取措施進行清除。

請注意，具體使用哪種方法還需根據實驗條件和細胞類型進行選擇，并遵循相關操作規范。同時，建議在專業人員的指導下進行細胞培養和支原體去除操作，以確保實驗的準確性和安全性。

對于費力擴增的細胞（如已轉染，或經過體外刺激），如果細胞中發現有支原體污染，但此細胞又不愿丟棄，希望繼續培養，推薦使用MB公司生產的復合抗生素Zell Shield?。

注意：

①每次使用Zell Shield?之前，務必先用廠家推薦的“懸浮沖洗法”處理細胞，這樣才能達到更好的支原體祛除效果。
②在祛除細胞支原體污染的過程中，需要環境、試劑及耗材確保潔凈，無新的支原體污染加入。
只要如法操作，在使用Zell Shield?四代后，細胞中的支原體即可祛除。

細胞祛除支原體試劑Zell Shield特點

（1）高效廣譜。Zell Shield^?通過阻止支原體、真菌、霉菌、致命病菌增殖過程中DNA及蛋白的合成，有效抑制上述微生物的增殖。   

（2）安全。無細胞毒性，采用復合支原體敏感抗生素，對大多數細胞株無毒。     

（3）活性穩定。在細胞培養期間，Zell Shield^?始終保持穩定的活性。     

（4）使用方便。Zell Shield^?為無菌溶液，可直接加入培養基使用。