細(xì)胞支原體檢測試劑盒PCR法使用方法

支原體不同于細(xì)菌，也不同于病毒，種類繁多，分布廣泛，造成的危害相當(dāng)大，涉及人、動物、植物及昆蟲等多個領(lǐng)域，給人類健康和科研工作帶來不利影響。在科研基礎(chǔ)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中很有必要對新引進(jìn)的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)過程中的細(xì)胞株使用細(xì)胞支原體檢測試劑盒對其進(jìn)行支原體檢測。

北京締一生物科技有限公司國內(nèi)總代理的德國MB產(chǎn)品細(xì)胞支原體檢測試劑盒PCR法（經(jīng)典法）(含Taq酶） Venor Gem Classic

細(xì)胞支原體檢測試劑盒PCR法（經(jīng)典法）(含Taq酶）特點(diǎn)

1.內(nèi)控對照為獨(dú)立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，僅一條陽性對照條帶，即可涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種。操作簡單，

易于觀察。

3.高靈敏度，若PCR反應(yīng)體系加入10μl樣本，支原體檢測限度為≤5或≤10CFU。

4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體，與細(xì)菌和真核DNA無交叉反應(yīng)。

5.試劑盒內(nèi)包含Taq酶，無需另外購買。

細(xì)胞支原體檢測試劑盒PCR法（經(jīng)典法）(含Taq酶）操作步驟

第1步：樣本處理

a.細(xì)胞培養(yǎng)上清

b.生物藥或需遵循藥典的樣本

說明：①樣品基質(zhì)可能會影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。

    ②細(xì)胞培養(yǎng)物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測靈敏度。

建議：樣本做DNA抽提處理，實(shí)現(xiàn)最高靈敏度。

推薦：德國MB公司生產(chǎn)的專用支原體DNA提取試劑盒Venor? Gem Sample Preparation Kit該DNA抽提試劑盒已經(jīng)過廣泛驗(yàn)證。

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建立

a. 細(xì)胞培養(yǎng)上清

b.生物藥或需遵循藥典的樣本

第4步：啟動PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。 當(dāng)樣本存在支原體污染時(shí)，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞10^3拷貝）。 陽性對照中支原體DNA＞

10^4拷貝，內(nèi)控對照條帶會完全消失。 可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。 如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋藭r(shí)應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor? Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒，詳見第25頁），然后再檢測。

儲存條件

2~8℃至少6個月。復(fù)溶后在-18℃保存。

北京締一生物科技有限公司國內(nèi)總代Ausbian品牌,德國Minerva-Biolabs微生物污染控制系列。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)使用的Ausbian澳洲進(jìn)口特級胎牛血清,新生牛血清，干細(xì)胞培養(yǎng)基,馬血清，德國MB支原體檢測/祛除試劑盒,DNA污染祛除試劑,支原體PCR/qPCR定量試盒等產(chǎn)品。歡迎訪問締一生物官網(wǎng)：www.276mk.com。聯(lián)系電話:4006661688。