細胞傳代后有支原體污染怎么辦呢

細胞傳代后如果出現支原體污染，需要采取一系列措施來應對和處理。以下是一些建議的解決方案：

一、確認污染

先需要確認細胞是否確實受到了支原體的污染。可以通過以下方法進行檢測：

熒光染色法：利用特異性的抗體將支原體染成熒光色，從而易于發現污染細胞。

實時定量PCR法：通過特定的引物和探針，能夠準確檢測出極微量的支原體DNA。

試劑盒檢測法：目前已有專門做支原體檢測的試劑盒,例如：德國MB 支原體pcr檢測試劑盒/qpcr檢測試劑盒。

二、處理污染

一旦確認細胞受到支原體污染，可以采取以下措施進行處理：

更換培養液：將受污染的培養液倒掉，換上新鮮的無菌培養液。

增加消毒劑濃度：在培養液中加入適量的消毒劑，如抗生素，以殺滅支原體。但需注意，抗生素可能對細胞本身也有一定影響，因此需要選擇合適的抗生素種類和濃度。

紫外線照射：利用紫外線對培養箱和實驗臺進行照射消毒，減少環境中的支原體數量。

使用支原體清除試劑盒：市面上有專門針對支原體污染的清除試劑盒，可以按照說明書進行操作。

反復懸浮沖洗和離心：通過反復懸浮沖洗和離心，可以去除細胞表面和細胞間隙中的部分支原體。結合使用特定的支原體祛除劑（如Zell Shield），可以更有效地抑制支原體的增殖。

三、預防再次污染

為了預防細胞再次受到支原體污染，可以采取以下措施：

嚴格無菌操作：在進行細胞培養過程中，必須嚴格遵守無菌操作規程，包括穿戴專門的工作服和鞋子、對所有實驗器具進行消毒、在實驗前后對實驗室進行徹底的清潔和消毒等。

使用支原體檢測合格的細胞株：在細胞傳代前，應對細胞株進行支原體檢測，確保使用無支原體污染的細胞株。

控制環境污染：保持實驗室環境的清潔和無菌，定期對環境進行檢測和消毒。

在培養基中加入適量的抗生素：在細胞培養基中加入適量的抗生素，以預防支原體的污染。但需注意，長期使用抗生素可能會對細胞本身產生不利影響，因此需要權衡利弊。

四、其他注意事項

在處理支原體污染時，應盡量避免將污染細胞與其他細胞或實驗材料接觸，以防止交叉污染。

如果細胞系受到嚴重污染且無法恢復，可能需要考慮丟棄該細胞系并重新培養新的細胞系。

綜上所述，細胞傳代后出現支原體污染需要采取一系列措施來應對和處理。通過確認污染、處理污染和預防再次污染等措施的綜合應用，可以有效地減少支原體對細胞培養的影響。