貼壁細(xì)胞形態(tài)不好或狀態(tài)差怎么辦?

對(duì)于貼壁細(xì)胞，如果細(xì)胞形態(tài)不好，(或者細(xì)胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等)可以在傳代的時(shí)候進(jìn)行如下操作:

倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3mIPBS洗滌一次用滴管吸走，然后再加入3ml的 PBS進(jìn)行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時(shí)候再開始正式的消化、吹打。

其次，把吹打下來的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺(tái)，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。

然后，加入10％胎牛血清配比的培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長情況以及形態(tài)，如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次，直到找到細(xì)胞完美形態(tài)。其中要注意結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長情況,對(duì)于有密度依賴性的細(xì)胞，等貼壁細(xì)胞比較多點(diǎn)的時(shí)候再傳傳代，反之亦然。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，如果細(xì)胞培養(yǎng)過程中有較多死細(xì)胞或細(xì)胞碎片，可將細(xì)胞吹散后用離心管收集離心，離心后沉淀分為兩層，活細(xì)胞處于上層，死細(xì)胞和細(xì)胞碎片處于下層，呈白色。去上清，加入新鮮培養(yǎng)基將上層細(xì)胞輕輕吹打混勻(不要用力過猛，從而將細(xì)胞碎片吹散)，再將細(xì)胞懸液接種至新的培養(yǎng)瓶，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。