qPCR ct值多少范圍內正常

qPCR（實時熒光定量PCR）中的Ct值（循環閾值）是一個關鍵參數，它代表了熒光信號開始由本底進入指數增長階段的拐點所對應的循環次數。關于qPCR中Ct值的正常范圍，可以歸納如下：

一、Ct值的正常范圍

染料法qPCR通常Ct值的范圍為15-35。

內參Ct值通常在十幾，**不要超過20。

目的基因的Ct值一般在十多到二十多，超過30但不超過35也可接受。

二、Ct值與樣本中靶標核酸含量的關系

低Ct值（通常在20以下）：表示樣本中靶標核酸含量較高，檢測到的病原體或目標基因的數量較多，熒光信號很快就達到了檢測閾值。

中等Ct值（在20到30之間）：表示樣本中靶標核酸含量中等，檢測到的病原體或目標基因數量適中。

高Ct值（在30到35之間）：表示樣本中靶標核酸含量較低，熒光信號需要更多的PCR循環才能達到檢測閾值，說明檢測到的病原體或目標基因數量較少。

三、Ct值的解讀與實驗優化

Ct值小于15：認為擴增在基線期范圍內，未達到熒光閾值，可能需要重新調整實驗條件或檢查樣本質量。

Ct值大于35：理論上模板起始拷貝數小于1，可認為無意義，需要重新考慮實驗設計或樣本的采集與處理。

重復孔之間的差值：應盡量不超過0.5（有些標準更為嚴格，要求重復孔間Ct值STD<0.2），以避免實驗結果受到干擾，產生假陽性或假陰性。

四、注意事項

當Ct值不可用時，可能是引物問題、模板濃度問題、加樣錯誤或樣本本身表達低等原因。這時，可以通過檢查溶解曲線、調整模板DNA濃度、重新加樣或考慮樣本的表達情況來解決問題。

溶解曲線應為單峰且無雜峰，以確保PCR產物的純度。擴增曲線應平滑且具有平臺期，無二次擴增上升曲線，以反映PCR反應的真實情況。

綜上所述，qPCR中Ct值的正常范圍是15-35，但具體范圍可能因實驗條件、樣本類型和實驗目的而有所不同。在解讀Ct值時，需要綜合考慮實驗條件、樣本質量和實驗結果等多個因素。