細胞培養中的污染監控與檢測——細菌

　　細胞培養過程出現污染——細菌污染

　　細胞培養是生物醫學研究的常見操作，其中避免細菌污染是重要一環。細胞是否干凈，直接關系到實驗結果穩定性的好壞。

　　一般情況下細胞實驗過程中出現的常見污染主要有：細菌污染、真菌污染和支原體污染。每種情況又分別有不同的癥狀和解決方法。

　　我們將分三篇文章，簡要概述三種不同污染的癥狀及處理方法。

　　一、細菌污染

　　細菌概述

　　細菌是一種原核細胞微生物，一般為微米級別。細胞培養過程中常見的污染菌為大腸桿菌、葡萄球菌、假單胞菌等。

　　細菌污染癥狀

　　與其他污染相比，細菌污染在細胞培養過程中“發病”更為迅速，較容易被發現。

　　具體表現為：細胞培養基短期內變黃且渾濁(大量酸性物質累積)靜置的培養液時不渾濁，但稍加震蕩，就有許多渾濁物漂起可見培養液中有大量圓球狀顆粒物漂浮細胞停止生長并有中毒表現，后出現大量死亡

　　細菌污染鑒定

　　簡易方法：

　　1、取少量培養液涂片染色檢查，憑經驗判斷細菌種類。

　　2、向肉湯培養基內滴入少量培養液，37 ℃培養以檢測。

　　專業試劑盒檢測。以Minerva Biolabs公司的細菌PCR檢測試劑盒為例。該試劑盒采用PCR方法，用于檢測生物樣品(包括細胞培養物和病毒貯存液)中是否存在細菌。根據序列分析，該試劑盒可檢測超過45種細菌屬，其中含污染細胞的常見菌屬。

　　試劑盒包括

　　凍干混合物：含引物/核苷酸/內部擴增對照DNA /聚合酶

　　復溶緩沖液

　　凍干的陽性對照DNA

　　PCR級水

　　樣本處理

　　樣本不用提DNA，只需熱滅活(95 °C 5分鐘)。樣本需不含抗生素。如含抗生素，則細胞應在不含抗生素的培養基中再培養至少一代。保質期 2-8℃可保存至少6個月。凍干試劑溶解后，需在-18℃以下保存。

　　結果分析：內控對照顯示PCR反應正常，樣本中無PCR抑制成分。460bp左右存在目的條帶，提示存在細菌污染。

　　細菌污染的祛除

　　對于一般細胞：發生污染直接丟棄，并對環境進行消殺，紫外線滅菌、消毒液擦拭培養箱、工作臺等。

　　對于重要且污染相對較輕的細胞：一般用抗生素的常用量的 5~10 倍作沖擊療法，用藥 24~48 小時后再換常規培養液，需要注意的是：

　　一旦發生污染后再使用抗生素常常難以根除，有的抗生素只有抑菌作用而無殺菌效應。 且有研究表明，大量使用抗生素，或對細胞基因組產生影響。

　　詳情請移步細胞培養中的抗生素究竟是敵是友?

　　今天的文章到這里就結束啦，下期我們接著聊聊細胞培養中的真菌污染問題，點點關注及時查看最新資訊!