細胞培養(yǎng)中支原體高效檢測法——支原體qPCR檢測

細胞培養(yǎng)中支原體高效檢測法——支原體qPCR檢測。

　　支原體放行檢測，在臨床相關(guān)的項目中發(fā)揮著重要作用。常見的一些研究，如干細胞治療項目、免疫細胞治療項目研究、CAR-T項目研究、抗體藥研究、疫苗等領(lǐng)域，以及還有一些重要的細胞培養(yǎng)、細胞典藏項目，也都需要對培養(yǎng)的細胞或收獲的產(chǎn)物，進行準確度較高的支原體檢測，以保證產(chǎn)物沒有支原體污染。

　　由于臨床項目研究的時效性與安全性，對于支原體檢測的效率以及準確度都有比較搞得要求。本期內(nèi)容，盤點高效得支原體檢測方法，一共分幾步!

　　Part.01 支原體DNA提取　

　　如果樣品得細胞培養(yǎng)液中，存在抑制PCR的物質(zhì)，比如較高濃度的血清濃度(超過12%)，則容易對下游的PCR反應(yīng)會產(chǎn)生抑制，此時就需要對樣品進行預(yù)處理，也就是對支原體DNA進行提取處理，以減輕對PCR反應(yīng)的影響。

　　另外，酚紅、細胞團、疫苗、凍存細胞和石蠟包埋的組織，也會對qPCR的檢測產(chǎn)生干擾，因此也需要提前對支原體DNA進行提取

　　如果樣品中蛋白含量高于10mg/ml，則先需將樣品預(yù)先用蛋白酶K進行處理。

　　Miverva Biolabs公司的支原體DNA提取試劑盒，通過對DNA的提取，來提高檢測的準確率。

　　Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Venor?GeM Sample Preparation Kit可從細胞上清和生物制品中分離支原體DNA，全程只需30分鐘。

　　分四步組成：細胞溶解，DNA特異性與層析柱結(jié)合，祛除殘留的污染物和抑制劑，洗脫DNA。該試劑盒符合歐洲藥典規(guī)范。

　　Part.02　　支原體qPCR檢測

　　藥典中記載的傳統(tǒng)的支原體檢查方法，如培養(yǎng)法和DNA染色法，都存在一定的局限：培養(yǎng)法大約需要7-29天，DNA染色法大約需要4-14天才能出結(jié)果，所需時間較長，且DNA染色法還存在假陽性和假陰性情況。

　　支原體核酸檢測法(包括常規(guī)PCR和熒光定量PCR，簡稱qPCR)是一種較早被國外采用的檢測方法，以其操作時間短(僅需2-3小時)、靈敏度和特異性高而深受相關(guān)從業(yè)人員的喜愛，藥典中也明確指出，經(jīng)過驗證，核酸法可替代指示細胞法進行支原體檢測。

　　國內(nèi)外藥廠放行檢測(product release testing)采用的較多的是德國Minerva Biolabs(簡稱MB)公司的Venor? Gem qEP (qPCR法)，無須跑膠，且能定量，使用起來更為便捷，通過歐洲藥典和日本藥典的方法學(xué)驗證。　　

　　Part.03　　支原體標準品

　　標準品就像支原體檢測過程中的一把標尺，能夠衡量方法是否達到標準，合乎要求。藥典中也規(guī)定了，如果要用核酸法替代藥典方法，也需要進行驗證，即靈敏度、特異性以及耐用性等都需要達到指定的要求。方法達到要求之后才能夠用于質(zhì)檢部門對樣品的檢查。

　　德國MB公司(Minerva Biolabs)提供有三類標準品：靈敏度標準品、特異性驗證用標準品，以及支原體DNA。

　　標準品與支原體DNA提取試劑盒、支原體qPCR檢測試劑盒，共同構(gòu)成完整的檢測體系，幫助從業(yè)者實現(xiàn)高效便捷準確的支原體檢測。

北京締一生物科技有限公司國內(nèi)總代Ausbian品牌,德國Minerva-Biolabs微生物污染控制系列。細胞培養(yǎng)實驗使用的Ausbian澳洲進口特級胎牛血清,新生牛血清，干細胞培養(yǎng)基,馬血清，德國MB支原體檢測/祛除試劑盒,DNA污染祛除試劑,支原體PCR/qPCR定量試盒等產(chǎn)品。歡迎訪問締一生物官網(wǎng)：www.276mk.com。聯(lián)系電話:4006661688.