德國Minerva-Biolabs支原體qPCR檢測試劑盒一步法操作步驟

德國Minerva-Biolabs公司支原體qPCR檢測試劑盒，也是熒光定量檢測法，今天締一生物小編介紹的是支原體qPCR檢測試劑盒一步法，何為“一步法”呢？簡單來說就是直接將內(nèi)控添加到預(yù)混液中，使用起來更加方便、節(jié)省時間。     

  德國Minerva-Biolabs支原體qPCR檢測試劑盒一步法，英文：VenorGeM? OneStep，下面小編詳細(xì)介紹一下VenorGeM? OneStep支原體qPCR檢測試劑盒一步法。

支原體qPCR檢測試劑盒一步法操作步驟與支原體qPCR檢測試劑盒經(jīng)典法大致相同：樣品處理?試劑制備?體系建立?啟動PCR反應(yīng)?結(jié)果判定。     

樣品處理：取100μl左右的細(xì)胞上清液95℃孵育后離心，取適量用于后續(xù)qPCR。細(xì)胞培養(yǎng)樣品易含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原體DNA。因而推薦進(jìn)行樣品穩(wěn)定化處理。

試劑制備：將緩沖液、預(yù)混液、陽性對照等試劑按照說明書要求，該離心的離心、該混合的混合，處理好后扣緊蓋子備用。

PCR體系建立：在PCR管中，根據(jù)需要，加入樣品、陽性對照、新鮮培養(yǎng)基（陰性對照），并且設(shè)置好重復(fù)孔，蓋好蓋子，震蕩混勻。

啟動PCR反應(yīng)：按照所需參數(shù)，設(shè)置好PCR儀，啟動程序（具體參數(shù)詳見產(chǎn)品使用說明或是締一生物官方網(wǎng)站，點(diǎn)擊下方閱讀原文即可）。

FAM通道：檢測支原體熒光信號。

HEX通道：檢測內(nèi)控對照熒光信號    支原體DNA和內(nèi)控DNA，存在信號之間的競爭性抑制支原體DNA越多，F(xiàn)AM通道信號越高檢測內(nèi)控對照的HEX信號通道信號越低。定量需要基于Ct值和DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線   Ct＜40為陽性結(jié)果。CCt≥40為陰性結(jié)果。               

支原體qPCR檢測試劑盒一步法操作步驟與支原體qPCR檢測試劑盒經(jīng)典法在以下幾個方面都是相同的：

①都具有高特異性：一次即可涵蓋所有常見易感染細(xì)胞的支原體物種（包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體）。與細(xì)菌和真核DNA無交叉反應(yīng)。       

②都具有高靈敏度：最高檢測限可達(dá)到10CFU/ml。         

③都具有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA，便于特異性驗證。       

④都有相應(yīng)配套的支原體絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品，便于最后定量檢測。不同之處在于，一步法試劑盒省去了配置內(nèi)控對照的環(huán)節(jié)，為實驗人員節(jié)省了寶貴時間，但相應(yīng)的，價格也會比經(jīng)典法試劑盒高出一部分。