細(xì)胞焦亡既不屬于壞死也不屬于凋亡，而是一種獨立的程序性細(xì)胞死亡方式。以下是對細(xì)胞焦亡、壞死和凋亡的詳細(xì)比較： 一、細(xì)胞焦亡 定義：細(xì)胞焦亡(Pyroptosis)又稱細(xì)胞炎性壞死，是一種程序性細(xì)胞死亡方式。它表現(xiàn)為細(xì)胞不斷脹大直至細(xì)胞膜破裂，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物的釋放，進(jìn)而激活強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)。 機(jī)制：細(xì)胞焦亡是由gasdermin介導(dǎo)的，依賴于炎性半胱天冬酶(主要是caspase-1、4...
RNase是核糖核酸酶（Ribonuclease）的簡稱，是一類能夠水解RNA的蛋白質(zhì)。以下是對RNase的詳細(xì)解釋：一、基本特性作用機(jī)制：RNase通過切斷RNA分子中的磷酸二酯鍵，將RNA降解為單核苷酸或寡核苷酸。存在范圍：這類酶廣泛存在于真核生物、原核生物以及部分病毒中，是生物體內(nèi)重要的核酸代謝酶之一。二、分類根據(jù)酶的作用機(jī)制和特性，RNase可以分為多種類型，如外切核糖核酸酶和內(nèi)切核...
耐高溫的DNA聚合酶是Taq酶，具體解釋如下：一、定義與來源Taq酶，也被稱為Taq DNA聚合酶，是從水生棲熱菌Thermus Aquaticus（Taq）中分離出的一種具有熱穩(wěn)定性的DNA聚合酶。這種細(xì)菌最初是在美國黃石公園的一個熱泉中被發(fā)現(xiàn)的。二、特性與應(yīng)用特性：Taq酶能夠耐受90℃以上的高溫而不失活，這是其最顯著的特點。在PCR循環(huán)中，包括變性（90°C左右）、退火（50°C左右）...
細(xì)胞培養(yǎng)基中支原體污染的危害是多方面的，以下是具體的危害分析：細(xì)胞生長受抑制：支原體污染會使細(xì)胞生長受到明顯抑制，導(dǎo)致細(xì)胞增殖速度減慢，甚至停止。這直接影響了細(xì)胞培養(yǎng)的效率和產(chǎn)量。細(xì)胞病變：支原體感染會導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生病變，細(xì)胞可能出現(xiàn)變圓、從培養(yǎng)瓶壁脫落等現(xiàn)象。這些病變細(xì)胞不僅失去了正常的生理功能，還可能對周圍的健康細(xì)胞產(chǎn)生負(fù)面影響。影響細(xì)胞代謝和功能：支原體污染會影響細(xì)胞的代謝途徑和功能，導(dǎo)...
誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（Induced Pluripotent Stem Cells，簡稱iPSC）是由已分化的體細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來。這些體細(xì)胞可以是來自成體組織的多種類型細(xì)胞，例如皮膚細(xì)胞、血細(xì)胞等。通過特定的基因重編程技術(shù)，將這些體細(xì)胞中的基因進(jìn)行重編程，使其恢復(fù)到類似胚胎干細(xì)胞的多能性狀態(tài)。這一過程通常涉及將幾個關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子（如Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc）導(dǎo)入體細(xì)胞中，從而激活細(xì)胞內(nèi)...
原代細(xì)胞容易污染的原因多種多樣，主要包括以下幾個方面：一、操作不當(dāng)在原代細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和傳代過程中，操作人員的不潔凈操作是導(dǎo)致污染的重要原因。例如，操作人員在打開培養(yǎng)瓶、移液等操作過程中，如果沒有在酒精燈火焰附近進(jìn)行或雙手沒有進(jìn)行充分消毒，就可能將微生物帶入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境。此外，無菌技術(shù)不到位或?qū)嶒炇噎h(huán)境的污染也可能導(dǎo)致原代細(xì)胞被外源性污染物污染。二、培養(yǎng)物和試劑污染培養(yǎng)物和試劑中可能存在微...
在PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）中，檢測樣品所需的微升數(shù)并不是一個固定的值，它取決于多種因素，包括PCR反應(yīng)體系的總體積、樣品的濃度、以及實驗的具體要求等。以下是對這一問題的詳細(xì)分析：一、PCR反應(yīng)體系的總體積PCR反應(yīng)體系的總體積通常在10~100微升之間，但具體數(shù)值可能因?qū)嶒炘O(shè)計和儀器要求而有所不同。常見的PCR反應(yīng)體系總體積包括10微升、20微升、50微升等。二、樣品的濃度樣品的濃度是影響P...
在生物學(xué)實驗和細(xì)胞培養(yǎng)中，關(guān)于10%胎牛血清（FBS）的濃度描述，通常是指體積濃度。這意味著在配制細(xì)胞培養(yǎng)基時，胎牛血清占總體積的10%，而剩余的90%則是基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
具體配制步驟如下（以配制100mL含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基為例）：消毒操作：在無菌工作臺下操作，確保所有用具和試劑都是無菌的，以防止細(xì)胞培養(yǎng)的污染。血清解凍：將胎牛血清提前解凍至適宜溫度。基礎(chǔ)培養(yǎng)基準(zhǔn)備：量取90mL...
2024年10月，山東大學(xué)齊魯醫(yī)院婦產(chǎn)科生殖醫(yī)學(xué)中心；山東大學(xué)臨沂市人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科 (Center for Reproductive Medicine, Department of Obstetrics and Gynecology, Qilu Hospital of Shandong University, 107 Wenhua West Road, Ji’nan, Shandong ...
2024年10月，呼和浩特**醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科；內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院；內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 (Department of Medical Laboratory, Huhhot First Hospital, Hohhot, Inner Mongolia 010020, China b College of Life Sciences, Inner Mongolia Agricul...
細(xì)胞代謝產(chǎn)物是細(xì)胞正常生理活動的必然產(chǎn)物，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，某些代謝產(chǎn)物的積累可能會影響培養(yǎng)液的外觀和細(xì)胞的狀態(tài)，甚至導(dǎo)致白色絮狀物的出現(xiàn)。蛋白質(zhì)沉淀：細(xì)胞在代謝過程中會產(chǎn)生大量的蛋白質(zhì)，當(dāng)培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)濃度過高時，可能會發(fā)生沉淀。這種沉淀通常是絮狀或顆粒狀，不溶于培養(yǎng)基。例如，在凍存細(xì)胞復(fù)蘇后，DMSO和血清混合后在低溫下容易導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性沉淀。磷酸鈣沉淀：血清中含有磷酸鈣，在特定條件下...
如果血清被污染了，處理的方法會因污染的類型和程度而有所不同。以下是一些常見的處理步驟和建議：一、識別污染類型首先，需要確定血清被何種類型的污染物污染。常見的污染物包括細(xì)菌、真菌、支原體、病毒以及化學(xué)物質(zhì)等。通過觀察血清的外觀、氣味以及進(jìn)行微生物培養(yǎng)等實驗，可以初步判斷污染的類型。二、處理不同類型的污染細(xì)菌污染：如果污染較輕，可以嘗試更換抗生素的種類，并加大抗生素的用量，以抑制細(xì)菌的生長。如果...
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）這一分子生物學(xué)領(lǐng)域的核心技術(shù)中，退火溫度扮演著至關(guān)重要的角色。它不僅是決定PCR反應(yīng)特異性的關(guān)鍵因素，還直接影響擴(kuò)增效率，進(jìn)而影響最終的實驗結(jié)果。本文旨在深入探討退火溫度對PCR反應(yīng)的影響，以及如何通過優(yōu)化退火溫度來提高PCR實驗的準(zhǔn)確性和可靠性。一、退火溫度：PCR反應(yīng)中的“黃金分割點”退火，作為PCR循環(huán)中的關(guān)鍵步驟，是指引物與模板DNA在特定溫度下特異性結(jié)合的...
在分子生物學(xué)研究中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種不可或缺的技術(shù)，它能夠在體外快速、特異地擴(kuò)增特定的DNA片段。然而，PCR的成功與否在很大程度上取決于一系列精細(xì)的實驗條件，其中退火溫度的設(shè)定尤為關(guān)鍵。本文將深入探討退火溫度的原理、實驗方法及其在PCR擴(kuò)增中的重要性，旨在為科研人員提供實用的指導(dǎo)和策略。一、退火溫度：PCR擴(kuò)增的“溫度計”退火溫度，即PCR循環(huán)中引物與模板DNA結(jié)合的溫度，是...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）作為分子生物學(xué)領(lǐng)域的核心技術(shù)，其成功實施離不開一系列酶制劑的精確作用。這些酶制劑在DNA的復(fù)制、修復(fù)及擴(kuò)增過程中扮演著重要的角色，它們不僅決定了PCR實驗的效率和準(zhǔn)確性，還直接影響了實驗結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性。本文將深入探討PCR實驗中常用的酶制劑，解析它們的功能及其在實驗中的具體應(yīng)用。一、DNA聚合酶：PCR反應(yīng)的“發(fā)動機(jī)”DNA聚合酶是PCR實驗中最核心的酶制劑，...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種高度敏感且強(qiáng)大的分子生物學(xué)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于科研、醫(yī)學(xué)診斷及法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。然而，盡管其技術(shù)成熟且應(yīng)用廣泛，PCR實驗卻極易受到各種形式的污染，尤其是核酸污染，這種污染往往會導(dǎo)致實驗失敗。本文將深入探討核酸污染如何影響PCR實驗，并闡述其導(dǎo)致實驗失敗的具體機(jī)制。核酸污染的定義與來源核酸污染是指在進(jìn)行核酸檢測時，樣本或檢測試劑受到其他核酸的污染，這些污染物可能來自實驗...
近日，德國維爾茨堡大學(xué)生物中心生物技術(shù)與生物物理學(xué)系的研究人員在Science期刊上發(fā)表了一篇具有重要意義的論文，這項工作由歐洲研究委員會、德國聯(lián)邦教育和研究部以及德國研究基金會資助。該研究聚焦于治療性單克隆抗體（mAbs）與CD20分子之間的相互作用機(jī)制。這項研究不僅為理解mAbs如何激活免疫系統(tǒng)以殺死B細(xì)胞提供了關(guān)鍵的分子層面見解，還可能對改進(jìn)現(xiàn)有mAbs藥物的設(shè)計和開發(fā)產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。背...
RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）和qPCR（實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是兩種基于聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)的核酸擴(kuò)增方法，它們在應(yīng)用、原理和特點上存在顯著區(qū)別。以下是兩者的詳細(xì)對比：
一、應(yīng)用范圍RT-PCR：主要用于定性分析，即檢測目標(biāo)基因的存在與否。常用于檢測RNA的表達(dá)水平，例如檢測基因的轉(zhuǎn)錄水平、mRNA的表達(dá)等。也廣泛應(yīng)用于基因轉(zhuǎn)錄水平分析、miRNA表達(dá)研究以及病毒...
?PCR擴(kuò)增?（Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種在體外擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)。其基本過程包括三個主要步驟：變性、退火和延伸，這三個步驟在一個循環(huán)中重復(fù)多次，從而實現(xiàn)DNA的指數(shù)級擴(kuò)增。 變性溫度：通常將反應(yīng)體系加熱至 94-98°C。目的：高溫使雙鏈 DNA 的氫鍵斷裂，兩條鏈解開成為單鏈，以便引物能夠與模板鏈結(jié)合。時間：一般持續(xù) 15-30 秒，...
實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real - time PCR），也稱為實時熒光定量 PCR，是一種在 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個 PCR 進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。基因表達(dá)定量分析基礎(chǔ)研究方面：在分子生物學(xué)基礎(chǔ)研究中，用于研究基因在不同細(xì)胞類型、發(fā)育階段以及不同環(huán)境刺激下的表達(dá)變化。例如，在胚胎發(fā)育研究中，可以利用 Real - time...
光線作為一種重要的環(huán)境因素，對細(xì)胞培養(yǎng)過程有著復(fù)雜而多樣的影響。在細(xì)胞培養(yǎng)實驗中，了解并控制光線條件，對于維持細(xì)胞的正常生長、繁殖以及保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性至關(guān)重要。一、光線對培養(yǎng)基成分的影響光線會直接作用于細(xì)胞培養(yǎng)基中的某些成分，特別是B族維生素（如B2、B12）和芳香族氨基酸（如色氨酸、酪氨酸）。這些成分在光照條件下會發(fā)生光化學(xué)轉(zhuǎn)化和光降解，導(dǎo)致培養(yǎng)基的性狀、性能及儲存有效期發(fā)生改...
熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）是一種在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，對擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。以下是熒光定量PCR的原理和步驟的詳細(xì)解釋：一、熒光定量PCR原理熒光定量PCR的基本原理是利用DNA聚合酶在PCR過程中合成新DNA鏈的特性，結(jié)合一種熒光標(biāo)記的探針或染料，通過實...
Taq DNA聚合酶的**反應(yīng)溫度主要與其催化活性有關(guān)。以下是對Taq DNA聚合酶**反應(yīng)溫度的詳細(xì)分析：一、最適催化溫度Taq DNA聚合酶在催化DNA合成時，有一個較高的最適溫度范圍，通常為7580℃。在這個溫度范圍內(nèi)，Taq DNA聚合酶的催化活性最高，延伸速率達(dá)到峰值。實驗證明，在最適溫度下，Taq DNA聚合酶的dNTP摻入速度非常快，可以達(dá)到35100 nt/(s·酶分子)，最...
細(xì)胞凍存與復(fù)蘇是一種用于長期儲存細(xì)胞的技術(shù)，其原理和過程分別如下：細(xì)胞凍存的原理細(xì)胞凍存是指將細(xì)胞保存在超低溫環(huán)境中，暫時停止細(xì)胞的代謝活動，使細(xì)胞進(jìn)入“冬眠”狀態(tài)的一項技術(shù)。一般細(xì)胞凍存遵循“慢凍”原則，這是因為在降溫過程中，細(xì)胞器會脫水，細(xì)胞內(nèi)可溶性物質(zhì)濃度增加，并形成冰晶。緩慢冷凍的過程可以逐漸使細(xì)胞脫水，以防止細(xì)胞內(nèi)形成大冰晶，因為大冰晶可能導(dǎo)致細(xì)胞膜和細(xì)胞器的損傷和破裂。同時，常使...
PCR技術(shù)（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）需要兩種引物的原因主要基于其擴(kuò)增DNA片段的機(jī)制和原理。以下是詳細(xì)解釋：一、PCR技術(shù)的基本原理PCR技術(shù)是一種在體外酶促擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)，類似于DNA的天然復(fù)制過程。它以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對分別與模板5′端和3′端互補(bǔ)的寡核苷酸為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸至完成新的DNA合成。其主要過程由變性、退火和延伸...
