lamp檢測(cè)技術(shù)的工作原理介紹

生產(chǎn)用于反應(yīng)的起始材料：

引物設(shè)計(jì)：LAMP擴(kuò)增過(guò)程中使用了多個(gè)引物，包括兩對(duì)外部引物（F3和B3）以及兩對(duì)內(nèi)部引物（FIP和BIP），以及一個(gè)環(huán)引物（Loop primer）。這些引物的設(shè)計(jì)是基于目標(biāo)DNA或RNA的特定序列，以確保高度特異性的擴(kuò)增。

循環(huán)擴(kuò)增：

生產(chǎn)啞鈴狀結(jié)構(gòu)的形成外部引物較短（21-24bp），并且在反應(yīng)混合物中的濃度較低，與模板結(jié)合的速度比內(nèi)部引物慢。向前和向后的內(nèi)部和外部引物與BstDNA聚合酶（在60-65°C下顯示出高鏈置換活性）相結(jié)合，形成啞鈴狀DNA結(jié)構(gòu)

伴隨循環(huán)的延伸和再循環(huán)：

隨后的階段涉及自引模板的指數(shù)擴(kuò)增和鏈的替換，從而產(chǎn)生雙鏈DNA的混合物。LAMP的最終輸出是花椰菜狀結(jié)構(gòu)。

與PCR不同，LAMP在單一溫度下（通常為60-65℃）進(jìn)行擴(kuò)增，因此不需要溫度循環(huán)。這有助于操作簡(jiǎn)單且耗時(shí)較短。

特殊結(jié)構(gòu)的引物：LAMP技術(shù)中的引物具有特殊的結(jié)構(gòu)，其中FIP（Forward Inner Primer）由F1c和F2組成，BIP（Backward Inner Primer）由B1c和B2組成。這些引物的結(jié)構(gòu)促使在擴(kuò)增過(guò)程中產(chǎn)生大量的特定結(jié)構(gòu)的產(chǎn)物，從而進(jìn)一步提高擴(kuò)增效率。

自我啟動(dòng)的擴(kuò)增過(guò)程：LAMP技術(shù)通過(guò)自我啟動(dòng)的過(guò)程在目標(biāo)核酸序列上進(jìn)行擴(kuò)增。一旦引物與目標(biāo)序列的互補(bǔ)區(qū)域匹配，引物的結(jié)構(gòu)促使產(chǎn)物不斷生成，形成一個(gè)DNA“蘑菇云”狀的結(jié)構(gòu)。

環(huán)結(jié)構(gòu)的形成：LAMP擴(kuò)增的一個(gè)關(guān)鍵特征是環(huán)結(jié)構(gòu)的形成。在LAMP擴(kuò)增過(guò)程中，Loop引物在互補(bǔ)區(qū)域與目標(biāo)序列結(jié)合，促使產(chǎn)物的循環(huán)形成。這種環(huán)結(jié)構(gòu)不僅穩(wěn)定了產(chǎn)物，還使得新的引物不斷與目標(biāo)序列結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)高效擴(kuò)增。

產(chǎn)物分析：LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物通常通過(guò)肉眼可見的方法進(jìn)行分析，例如使用熒光染料，pH指示劑或者裸眼觀察沉淀物等。產(chǎn)物的積累會(huì)導(dǎo)致可觀察的變化，從而確定擴(kuò)增是否成功。