水樣DNA提取試劑盒的提取方法與流程

北京締一生物提供的水樣DNA提取試劑盒（英文名：AquaScreen^? Fast Extract）用于從水樣中提取微生物DNA。該試劑盒來自德國(guó)Minerva-Biolabs原裝進(jìn)口，訂購(gòu)產(chǎn)品可聯(lián)系本網(wǎng)站客服。

水中微生物DNA提取試劑盒（英文名：AquaScreen^? Fast Extract）用于從水樣中提取微生物DNA。該試劑盒遵循ISO/TS 12869:2012的設(shè)計(jì)要求。提取的DNA可用于下游的PCR或qPCR檢測(cè)。

水中微生物DNA提取試劑盒AquaScreen^? Fast Extract

貨號(hào) 32-1010規(guī)格10次/盒

該試劑盒采用0.4μm濾膜截獲微生物，然后微生物被加入到濾膜上的離子活性劑和促溶劑裂解。隨后進(jìn)行DNA抽提。

DNA抽提由四步組成：

1. 菌體裂解

2. DNA與離心柱的特異結(jié)合

3. 祛除殘留污染物和抑制劑

4. DNA的洗脫

整個(gè)過程大約30分鐘。

水樣DNA提取試劑盒的提取方法與流程：

（一）操作步驟概覽

（二）操作步驟詳解

步驟1. 樣本過濾

1.1 從試劑盒中小心取出濾膜。用水樣潤(rùn)濕濾膜。

1.2 將濾膜放置在濾器中，并過濾必要體積的水樣。

步驟2. 菌體裂解

* 提前準(zhǔn)備：預(yù)先將恒溫儀設(shè)置到70℃，將恒溫箱設(shè)置到37℃。

2.1將樣本過濾后的濾膜翻轉(zhuǎn)放置到試劑盒提供的Incubation Dish（平皿）中。

2.2 吸取2ml lysis buffer（裂解液），并加到濾膜上。

2.3 將濾膜浸泡在裂解液中，小心搖勻平皿并在37°C孵育30分鐘。

2.4 用平皿中的裂解液沖洗濾膜，并搖晃平皿10秒鐘。

2.5 將平皿中的400 μl裂解液轉(zhuǎn)移至Incubation Tube（孵育管），70 °C孵育10分鐘。

2.5a可選項(xiàng)：剩余裂解液可再取400μl用于DNA抽提，以獲得更多的DNA樣本。

2.6 樣本短暫離心，并加入400 μl Binding Buffer（結(jié)合液），立即渦旋充分混勻，以防止DNA沉淀。請(qǐng)勿離心樣本，并立即進(jìn)行下一步。

步驟3. DNA提取

* 提前準(zhǔn)備：（1）Wash Buffer 1（洗液1）和Wash Buffer 2（洗液2）**次使用前，用無水乙醇復(fù)溶（請(qǐng)參見瓶上標(biāo)簽）

（2）將恒溫儀設(shè)置到70℃，并將Elution Buffer（洗脫液）放在上面預(yù)熱。

3.1 將步驟2.6中的混合液（~800 μl）轉(zhuǎn)移到Collection Tube（收集管）內(nèi)的Spin Column（離心柱）中，小心液體不要沾到離心柱的邊緣。

3.2 離心柱離心≥10000 × g，1分鐘。棄掉收集管中的液體。重新將離心柱插到原有的收集管中。

3.2a 可選擇：在步驟2.5a中，多取的一份樣本重復(fù)以上操作，不用換離心柱。

3.3 離心柱中加入500μl洗液1。離心≥10000×g，1分鐘。棄掉收集管中的液體。重新將離心柱插到原有的收集管中。

3.4 離心柱中加入500μl洗液2。離心≥10000×g，1分鐘。棄掉收集管中的液體。將離心柱插到一個(gè)新的收集管中。

3.5**速度離心3分鐘，以去除殘留的洗液2。

3.6棄掉收集管。將離心柱插入到試劑盒提供的Sample Storage Tube（樣本保存管）中。

3.7吸取60μl已70℃預(yù)熱的洗脫液，直接加到離心柱的硅膠膜上。硅膠膜表面應(yīng)全部覆蓋洗脫液。

3.8室溫靜置2分鐘，然后離心8000×g，2分鐘，以洗脫DNA。

3.9樣本保存管中的洗脫液即包含DNA，可直接用于PCR，或儲(chǔ)存在2~8℃，可存放1周。長(zhǎng)期儲(chǔ)存是在≤-18℃。

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