雄激素改變前列腺癌細(xì)胞外小泡和小RNA的異質(zhì)性

　　前列腺癌細(xì)胞的增殖和存活是由雄激素受體(AR)與雄激素類固醇激素結(jié)合后驅(qū)動(dòng)的。控制AR信號(hào)軸是前列腺癌治療的重點(diǎn)，因此，了解雄激素和AR在細(xì)胞外小泡(EV)分泌和運(yùn)輸中的作用是至關(guān)重要的。在本研究中，作者報(bào)道了晚期轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者血漿中CD9和前列腺特異性膜抗原(PSMA)雙陽(yáng)性的血漿來源的循環(huán)小泡增多，而CD9和CD63小細(xì)胞外小泡(S-EVs)的雙陽(yáng)性在局限性前列腺癌患者中顯著增加。雙氫睪酮(DHT)和臨床拮抗劑苯扎魯胺(ENZ)處理雄激素改變了AR表達(dá)前列腺癌細(xì)胞中CD9陽(yáng)性S-EV的異質(zhì)性和大小，而不同處理組對(duì)總S-EV總數(shù)和蛋白含量的評(píng)估沒有改變。此外，激素刺激對(duì)S-EVS的小RNA貨物有強(qiáng)烈而特異的影響。共有543個(gè)小RNA受雄激素調(diào)控，包括miR-19-3p和miR-361-5p。對(duì)S-EVS異質(zhì)性和小RNA載量的分析可能為前列腺癌提供臨床應(yīng)用，并為進(jìn)一步了解去勢(shì)耐受前列腺癌雄激素靶向治療的耐藥機(jī)制提供信息。

　　前列腺癌是全球第四種最常見的癌癥，2018年有130萬男性確診，3600人死亡。幾乎所有的前列腺癌都表現(xiàn)出雄激素依賴性生長(zhǎng)，因此，雄激素剝奪療法(ADT)是晚期前列腺癌的主要治療方法。ADT旨在通過阻止核轉(zhuǎn)錄因子雄激素受體(AR)的激活來抑制腫瘤生長(zhǎng)。絕大多數(shù)男性最初對(duì)ADT有反應(yīng)，但腫瘤進(jìn)展是不可避免的，表現(xiàn)為前列腺特異性抗原(PSA)水平升高、新的病變或進(jìn)行性癥狀。這種致命的表型被稱為去勢(shì)抵抗前列腺癌(CRPC)，但仍然是由持續(xù)的AR信號(hào)驅(qū)動(dòng)的。因此，AR軸仍然是轉(zhuǎn)移性CRPC患者的關(guān)鍵治療靶點(diǎn)。據(jù)報(bào)道，一些因素參與了CRPC的發(fā)展，如AR擴(kuò)增、AR剪接變異體的表達(dá)、AR突變、性腺外雄激素合成、AR協(xié)同調(diào)節(jié)活性增強(qiáng)以及進(jìn)一步激活A(yù)R通路的信號(hào)級(jí)聯(lián)上調(diào)。

　　細(xì)胞外小泡(EVS)由細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境和體循環(huán)中。EVS幾乎由所有細(xì)胞分泌，含有脂膜包裹的細(xì)胞成分。EVS可以將多種生物活性成分(包括蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、代謝物和核酸)輸送到鄰近或遠(yuǎn)處的細(xì)胞。在這樣做的過程中，ev已經(jīng)被證明是細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)和疾病病理生物學(xué)的關(guān)鍵。一些研究表明，細(xì)胞在受到激素、藥物、鈣或神經(jīng)酰胺等特定類脂類刺激時(shí)可以分泌EV。作者研究了最有效的雄性激素雙氫睪酮(Dht)和臨床上用于治療慢性前列腺炎的非甾體AR拮抗劑苯扎魯胺(Enz)對(duì)小EV(直徑30-150 nm)蛋白含量的影響。DHT是最有效的雄性激素，可激活ar介導(dǎo)的信號(hào)，并影響調(diào)控增殖和生存的靶基因的mRNA和蛋白表達(dá)。分泌的s - ev可在雄激素缺乏的情況下加劇前列腺癌細(xì)胞的增殖。作者證明了DHT增加了前列腺癌細(xì)胞總S-EV中CD9的豐度。然而，DHT對(duì)S-EVS和其他S-EVS貨物組分的異質(zhì)性的影響尚不清楚。

　　在過去的幾年里，技術(shù)已經(jīng)出現(xiàn)，并被用于EV，特別是那些能夠?qū)蝹€(gè)EV進(jìn)行分析的技術(shù)。這些技術(shù)為以跨膜蛋白為基礎(chǔ)的EV的特征提供了可能性，例如最豐富的Tetraspanins。科瓦爾等人證明使用Tetraspanin特異性抗體從樹突狀細(xì)胞中分離EV可以從S-EV亞群中分離出不同的蛋白質(zhì)。此外，一項(xiàng)活體成像技術(shù)也證明了CD9陽(yáng)性(CD9+)和CD63陽(yáng)性(CD63+) ev之間的差異，其中CD63+ ev可以通過刺激HeLa細(xì)胞中的組胺H1受體而誘導(dǎo)。相比之下，CD9+電動(dòng)車則不受影響。以往的獨(dú)立研究報(bào)道，EV標(biāo)記物表達(dá)于離散的亞細(xì)胞定位，并具有特定的生物學(xué)功能。

　　雄激素作用下LNCaP細(xì)胞的掃描電鏡圖像

　　親本細(xì)胞表面的成像分析，如原子力顯微鏡和掃描電鏡，已經(jīng)被用來幫助表征EVS的分泌。掃描電鏡對(duì)LNCaP細(xì)胞表面的分析表明，在添加CSS的培養(yǎng)基中缺乏DHT可以激活EV從細(xì)胞表面萌發(fā)。另一方面，dht的加入增加了細(xì)胞的表面積，并誘導(dǎo)了質(zhì)膜突起絲狀足的存在，這一點(diǎn)在添加全血清的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的細(xì)胞和任何dht處理的細(xì)胞中也可以觀察到。作者用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞膜上是否存在Tetraspanin EV標(biāo)志物進(jìn)行了定量測(cè)定。作者發(fā)現(xiàn)DHT處理的LNCaP細(xì)胞表面CD9和CD63的平均熒光強(qiáng)度(MFI)明顯高于CSS、CSS+ENZ或CSS+DHT+ENZ中生長(zhǎng)的細(xì)胞，CD9和CD63的平均熒光強(qiáng)度(MFI)明顯高于CSS、CSS+DHT+ENZ和CSS+DHT+ENZ。