細胞培養(yǎng)中如何清除支原體污染

在細胞培養(yǎng)中，清除支原體污染是一個重要的環(huán)節(jié)。以下是一些常用的清除支原體污染的方法：

使用支原體祛除劑Zell Shield?：它是復合抗生素成分，抑制支原體蛋白和DNA合成，也抑制細菌和真菌。適合細胞已發(fā)生支原體污染，但又不愿丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)（如已轉(zhuǎn)染或大量擴增的細胞）的情況。使用時需要采用懸浮沖洗法，并連續(xù)培養(yǎng)三代。

清洗純化法：這種方法包括細胞營養(yǎng)馴化、優(yōu)質(zhì)細胞群的篩選、細胞清洗以及反復離心洗滌。其原理是利用離心力、細胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差來清除支原體。通過反復洗滌細胞和低速離心換液，可以將潛在的支原體數(shù)量降低至極限。如果結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用，效果會更好。

動物體內(nèi)接種除菌法：將被支原體污染的腫瘤細胞接種在同種動物的皮下或腹腔中，利用動物的免疫系統(tǒng)來消滅支原體。一定時間后，從動物體內(nèi)取出細胞再進行培養(yǎng)繁殖。

巨噬細胞吞噬法：從動物腹腔中取得巨噬細胞，經(jīng)過純化后與被支原體污染的細胞培養(yǎng)液混合培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，可以定期使用支持物培養(yǎng)法驗證支原體是否被消除干凈。

抗生素處理：支原體對多粘菌素、利福平、磺胺藥物等普遍耐藥，但對四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等抗生素有抑制活性。因此，可以選擇這些抗生素來處理被支原體污染的細胞。

需要注意的是，不同的細胞類型和支原體污染程度可能需要采用不同的清除方法。此外，處理過程中應確保操作規(guī)范，避免交叉污染。同時，為了預防支原體污染的發(fā)生，應定期檢查細胞培養(yǎng)物，確保培養(yǎng)環(huán)境的清潔和無菌。

最后，雖然上述方法可以有效地清除支原體污染，但也可能對細胞造成一定的不良影響。因此，在清除支原體污染的同時，也應關注細胞的生長和代謝狀態(tài)，確保細胞的正常生長和繁殖。