支原體清除劑能徹底清除實驗室細胞支原體嗎

支原體清除劑在實驗室中用于清除細胞培養(yǎng)中的支原體污染。部分清除劑在殺滅細胞外的支原體方面具有一定的效果，但并不能保證徹底清除實驗室中的支原體。

德國Minerva Biolabs公司生產的Mynox?是一種支原體清除劑，用于消除細胞、病毒培養(yǎng)物、以及其他生物制劑中的支原體。支原體消除只需6 - 8天(加上4代DNA沖洗)。處理后，Mynox?很容易通過介質更換去除。

Mynox?是一種無抗生素的生物試劑，可以整合到支原體膜中，損害其完整性。它的活性基于生物物理機制，因此不會產生耐藥菌株。其結果是滲透性內流導致支原體膜完全解體。被根除支原體，細胞可以立即恢復其原有的形態(tài)和正常增殖速度。迄今為止，Mynox?尚未顯示會導致正常細胞特性的任何變化。

Mynox?細胞支原體清除劑使用方法

一、貼壁細胞的處理方法

1、制備細胞和『治療液』

在無菌的6厘米培養(yǎng)皿中加入2.8 ml含5% (v/v) FCS的標準細胞培養(yǎng)基。加入200μl Mynox?(1瓶)。

加入2ml新鮮胰蛋白酶化的10^4 - 10^5個細胞。

包括細胞在內的處理混合物的總體積為5ml。

2、Mynox?的處理和去除

在正常生長條件下，將細胞與『治療液』混合物保持一整個傳代過程(約6至8天)。然后除去含有Mynox?的培養(yǎng)基，將細胞在標準培養(yǎng)基中傳代。8天為上限，若細胞未長滿皿底，終止處理，丟棄含有Mynox?的培養(yǎng)基，并添加新鮮的標準細胞培養(yǎng)基。

懸浮細胞系的處理

1、制備細胞和『治療液』

使用無菌離心管配制『治療液』。加入1.6 ml 0.125%胰蛋白酶和5 mM EDTA。加入200μl Mynox?(1瓶)。將1.6 ml含有10% (v/v) FCS和10^4 - 10^5細胞的標準細胞培養(yǎng)基，從懸浮細胞培養(yǎng)液中轉移到『治療液』混合物中，進行渦旋。包括細胞在內的處理混合物的總體積為3.4 ml。

2、Mynox?的處理和去除

37℃孵育30分鐘。將細胞輕離心(600 × g) 5分鐘，丟棄上清。將細胞重懸于不含Mynox?的標準細胞培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)瓶中。

非包膜病毒的處理

冷凍或新鮮等量的細胞和無細胞碎片的病毒懸浮液可以處理。病毒滴度不影響治療的成功。

1、制備細胞和『治療液』

使用1.5 ml帶安全鎖的無菌反應管配制消毒液。加入1 ml不含FCS的細胞培養(yǎng)基。加入100μl Mynox?。

將含有8% (v/v) FCS的125μl病毒原液轉移到混合物中。漩渦。包括病毒原液的處理混合物的總體積為1.225 ml。

2、Mynox?的處理和去除

在室溫下將消去液孵育2小時。將處理混合物在培養(yǎng)基中稀釋1:10，停止反應。

包膜病毒的處理

包膜病毒外脂膜的組成與Mynox?的靶標支原體膜相當。這些病毒也容易受到Mynox?滅活的影響，具體取決于所使用的處理時間和濃度。為了獲得無支原體的病毒懸浮液，并具有可接受的繼代培養(yǎng)水平，初始病毒滴度應高于10^6 TCID50。

冷凍或新鮮等量的細胞和無細胞碎片的病毒懸浮液可以處理。

1、制備細胞和『治療液』

使用無菌15ml螺旋蓋反應管配制消去液。加入4.4 ml不含FCS的細胞培養(yǎng)基。加入100μl Mynox?。將0.5 ml含有8% (v/v) FCS的病毒原液轉入混合物中。漩渦。包括病毒原液的處理混合物的總體積為5ml。

2、處理和Mynox?去除

在室溫下將消去液孵育30分鐘。將處理混合物在培養(yǎng)基中稀釋1:10，停止反應。