PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程出現(xiàn)的?二聚體及非特異性產(chǎn)物,拖尾、彌散,是什么原因?PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程出現(xiàn)的?二聚體及非特異性產(chǎn)物是什么原因? 二維碼
發(fā)表時(shí)間:2023-11-16 16:40 PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程出現(xiàn)的二聚體及非特異性產(chǎn)物,拖尾、彌散,是什么原因? 二聚體及非特異性產(chǎn)物 一般小于100bp 的條帶可基本判斷為引物二聚體 主要原因: · 引物設(shè)計(jì)不合理,引物自身具有互補(bǔ)性 · 引物濃度不適 · 鎂離子濃度過(guò)高,退火溫度過(guò)低 解決方法: · 重新設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行 BLAST 檢測(cè) · 降低鎂離子濃度,提高退火溫度 · 增加模板用量 拖尾、彌散 現(xiàn)象:電泳出現(xiàn)拖尾、涂抹帶 可能原因: · 酶用量過(guò)多 · 模板純度較低 · dNTP、鎂離子濃度過(guò)高 · 循環(huán)次數(shù)過(guò)多 解決方法: · 減少用酶量或使用特異性高的熱啟動(dòng)酶擴(kuò)增 · 純化模板 · 減少 dNTP 用量,摸索鎂離子濃度 · 減少循環(huán)次數(shù) |
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