PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程出現(xiàn)的?二聚體及非特異性產(chǎn)物,拖尾、彌散,是什么原因?

PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程出現(xiàn)的?二聚體及非特異性產(chǎn)物是什么原因?

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發(fā)表時(shí)間:2023-11-16 16:40

PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程出現(xiàn)的二聚體及非特異性產(chǎn)物,拖尾、彌散,是什么原因?

二聚體及非特異性產(chǎn)物

一般小于100bp 的條帶可基本判斷為引物二聚體

主要原因:

· 引物設(shè)計(jì)不合理,引物自身具有互補(bǔ)性

· 引物濃度不適

· 鎂離子濃度過(guò)高,退火溫度過(guò)低

解決方法:

· 重新設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行 BLAST 檢測(cè)

· 降低鎂離子濃度,提高退火溫度

· 增加模板用量


拖尾、彌散

現(xiàn)象:電泳出現(xiàn)拖尾、涂抹帶

可能原因:

· 酶用量過(guò)多

· 模板純度較低

· dNTP、鎂離子濃度過(guò)高

· 循環(huán)次數(shù)過(guò)多

解決方法:

· 減少用酶量或使用特異性高的熱啟動(dòng)酶擴(kuò)增

· 純化模板

· 減少 dNTP 用量,摸索鎂離子濃度

· 減少循環(huán)次數(shù)

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