PCR實(shí)驗(yàn)過程出現(xiàn)的?二聚體及非特異性產(chǎn)物，拖尾、彌散，是什么原因？

PCR實(shí)驗(yàn)過程出現(xiàn)的二聚體及非特異性產(chǎn)物，拖尾、彌散，是什么原因？

二聚體及非特異性產(chǎn)物

一般小于100bp 的條帶可基本判斷為引物二聚體

主要原因：

· 引物設(shè)計(jì)不合理，引物自身具有互補(bǔ)性

· 引物濃度不適

· 鎂離子濃度過高，退火溫度過低

解決方法：

· 重新設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行 BLAST 檢測

· 降低鎂離子濃度，提高退火溫度

· 增加模板用量

拖尾、彌散

現(xiàn)象：電泳出現(xiàn)拖尾、涂抹帶

可能原因：

· 酶用量過多

· 模板純度較低

· dNTP、鎂離子濃度過高

· 循環(huán)次數(shù)過多

解決方法：

· 減少用酶量或使用特異性高的熱啟動酶擴(kuò)增

· 純化模板

· 減少 dNTP 用量，摸索鎂離子濃度

· 減少循環(huán)次數(shù)