預防細胞實驗超凈工作臺內支原體污染的方案

在細胞培養實驗中，支原體污染是一個普遍且棘手的問題。據估計，細胞培養中的支原體污染率可高達15-35%，甚至在某些情況下達到63%。由于支原體感染難以通過肉眼檢測，且對細胞生長率影響較小，因此很容易被忽視，從而影響實驗結果的可靠性。本文旨在探討如何有效預防細胞實驗超凈工作臺內發生支原體污染。

1. 控制環境污染

環境是支原體污染的主要來源之一。因此，控制環境污染是預防支原體污染的首要任務。細胞培養實驗室應保持整潔，定期清潔和消毒，包括環境空氣消毒、物體表面消毒、生物安全柜或超凈工作臺滅菌及培養箱消毒。目前，過氧化氫干霧滅菌技術被認為是替代甲醛熏蒸的有效消毒方式，其滅菌效果全面徹底，不留死角。

2. 嚴格實驗操作

實驗操作不規范是導致支原體污染的重要原因。在細胞培養過程中，應執行良好的細胞培養規范，包括一次只培養一個細胞系，清晰標記并專用移液器和吸頭，避免交叉污染。同時，應定期維護移液器和液體處理控制器，減少液體溢漏和飛濺，從而降低污染風險。

3. 保證無菌環境

細胞培養和器材的無菌狀態是預防支原體污染的關鍵。在細胞培養過程中，應使用無菌耗材，并在使用前進行高壓滅菌處理。對于細胞培養試劑和培養基，應使用0.1μm孔徑的無菌過濾器進行過濾，以有效防止支原體通過氣溶膠傳播。

4. 通風與防護

通風是預防支原體污染的重要手段。在細胞間工作臺四周的通風應保持暢通，紫外滅菌時和做實驗時均應開啟通風設備。75%的循環風可以有效阻止支原體進入工作區域。此外，使用支原體專用殺除劑的濕巾對工作臺、超凈臺、培養箱等細胞培養環境進行定期消毒，也是有效預防支原體污染的措施。

5. 支原體檢測與清除

定期檢測所有細胞系的支原體污染情況，尤其是新細胞系，是預防支原體污染的必要措施。將新細胞系隔離在單獨的培養箱中，直到明確證明其未受支原體污染。若細胞發生支原體污染，應使用有效的支原體清除試劑進行清除。基于截短側耳素類衍生物和四環素衍生物的抗生素溶液聯合使用，可以取得良好的效果。

結論

預防細胞實驗超凈工作臺內發生支原體污染是一個綜合性的任務，需要控制環境污染、嚴格實驗操作、保證無菌環境、加強通風與防護以及定期檢測與清除支原體。通過執行這些措施，可以顯著降低細胞培養實驗室的支原體污染及傳播風險，確保實驗結果的準確性和可靠性。