支原體污染的PCR檢測步驟中，裂解之后主要進行的是DNA的提取、PCR擴增以及產物的分析。以下是對這些步驟的詳細解釋：一、DNA提取裂解細胞后，需要采用適當的方法立即抽提DNA。常用的DNA提取方法有標準酚/氯/仿抽提法、乙醇沉淀法或其他DNA抽提方法。這些方法的目的是從細胞裂解物中分離出支原體DNA，以便進行后續的PCR擴增。二、PCR擴增引物設計與選擇：針對支原體的特異性序列，設計并合成...
在細胞培養過程中，培養基顏色的變化是一個常見的現象，而這種變化往往反映了培養環境的多種因素。特別是當培養基從紅色變為黃色時，這通常意味著一些重要的生理或化學變化正在發生。本文將詳細探討這一現象的原因，并解析其背后的機制。一、酚紅作為pH指示劑的作用培養基中的紅色通常來源于酚紅，這是一種常用的pH指示劑。在正常的pH范圍內（pH 6-8），酚紅呈現紅色。當培養基的pH值發生變化時，酚紅的顏色也...
關于美國藥典對于qPCR病毒檢測斜率的具體要求，可能因不同的病毒檢測項目、檢測目的以及具體的實驗條件而有所差異。然而，一般而言，在qPCR實驗中，斜率是與擴增效率密切相關的參數，它反映了PCR反應中DNA擴增的速率。在理想的qPCR實驗中，擴增效率通常期望在90%110%之間，對應的斜率范圍一般在-3.58-3.10之間（也有說法認為斜率范圍應滿足-3.8-3.1，對應擴增效率為83.3%1...
細胞真菌污染是細胞培養過程中常見且需要重視的問題，以下是對該問題的詳細分析及其處理方法：一、細胞真菌污染的原因實驗環境污染：實驗室環境中存在大量的空氣中懸浮的真菌孢子，這些孢子可能通過實驗器皿、培養物和培養器等途徑進入細胞培養系統，導致真菌污染。培養物污染：培養物中的真菌污染源可以是培養基、血清和其他添加劑等。這些污染源可能在生產、儲存和使用過程中被真菌污染，從而引入細胞培養系統。操作不當：...
在分子生物學實驗中，RNA的提取和分析是許多研究的基礎步驟。然而，RNA酶污染卻常常成為影響實驗結果的關鍵因素。了解RNA酶的特性及其對RNA實驗的影響，對于確保實驗的成功至關重要。RNA酶，也被稱為核糖核酸酶，是一類能夠降解RNA的酶。它們廣泛存在于各種組織和細胞中，同時也可能通過外源性途徑進入實驗系統，如試劑、耗材、器械、操作人員的皮膚或唾液，以及空氣和灰塵等。RNA酶具有高度的穩定性和...
Taq酶和Pfu酶都是DNA聚合酶，在PCR（聚合酶鏈式反應）技術中發揮著重要作用，但它們在多個方面存在顯著的異同。以下是對這兩種酶的詳細比較：相同點來源：Taq酶是從水生棲熱菌（Thermus Aquaticus）中分離出的具有熱穩定性的DNA聚合酶，而Pfu酶則是在嗜熱的古核生物火球菌屬內發現的。兩者都來源于耐熱生物，因此都具有較好的熱穩定性。PCR應用：兩者都適用于PCR反應，能夠在高...
熒光定量PCR（qPCR）中的Ct值是一個至關重要的參數，它提供了關于樣本中核酸含量的重要信息。以下是對Ct值的詳細解析：一、Ct值的定義Ct值，全稱為Cycle Threshold，即循環閾值。在qPCR過程中，當擴增產物的熒光信號達到設定的熒光閾值時，所對應的擴增循環數即為Ct值。這里的C代表Cycle（循環），T代表Threshold（閾值）。二、Ct值與核酸含量的關系Ct值與樣本中起...
qPCR（實時熒光定量PCR）中的Ct值（循環閾值）是一個關鍵參數，它代表了熒光信號開始由本底進入指數增長階段的拐點所對應的循環次數。關于qPCR中Ct值的正常范圍，可以歸納如下：一、Ct值的正常范圍染料法qPCR通常Ct值的范圍為15-35。內參Ct值通常在十幾，**不要超過20。目的基因的Ct值一般在十多到二十多，超過30但不超過35也可接受。二、Ct值與樣本中靶標核酸含量的關系低Ct值...
細胞傳代次數過多確實會導致細胞老化。以下是對這一觀點的詳細解釋：一、細胞老化的定義與表現細胞老化是指細胞在生命過程中逐漸失去其正常功能和生理特性的過程。這通常表現為細胞形態的改變、代謝活動的減緩、增殖能力的下降以及對環境刺激的敏感性增加等。二、細胞傳代次數與老化的關系傳代次數的增加：在細胞培養過程中，傳代是一個常見的操作，旨在維持細胞數量并防止過度生長。然而，隨著傳代次數的增加，細胞的生理和...
在細胞培養過程中，支原體污染是一個常見且棘手的問題。支原體是一類極其微小的微生物，缺乏細胞壁，呈高度多形性，能夠在不知不覺中潛入細胞培養體系，對細胞的生長、形態和功能等方面產生諸多不良影響。因此，準確判斷細胞是否被支原體污染至關重要，這關系到實驗結果的準確性和可靠性。以下將詳細介紹幾種判斷細胞是否被支原體污染的方法。一、觀察細胞形態和生長特征支原體污染嚴重時，可引起細胞生長減慢、培養基pH變...
間充質干細胞與干細胞之間的關系可以從以下幾個方面進行闡述：一、定義與分類干細胞：是一類具有自我復制能力和多向分化潛能的細胞。它們可以分化為多種不同類型的細胞，是形成人體各種組織器官的始祖細胞。干細胞根據所處的發育階段分為胚胎干細胞和成體干細胞；根據發育潛能分為全能干細胞、多能干細胞和單能干細胞（或專能干細胞）。間充質干細胞：是干細胞家族中的一種特定類型的成體干細胞，主要存在于多種組織中的間充...
去除外泌體的胎牛血清（即去外泌體胎牛血清）在細胞培養和研究中具有重要作用。以下是對其作用的具體闡述：一、基本概念去外泌體胎牛血清是通過特定方法（如過濾法）去除血清中大部分外泌體后的胎牛血清。胎牛血清是細胞培養中常用的重要營養來源，富含多種細胞生長所需的營養成分，如氨基酸、維生素、礦物質以及各種生長因子等。然而，普通胎牛血清中含有大量的牛源外泌體，這些外泌體在某些特定的研究和應用場景中可能會帶...
在培養基中，關于血清是否應該過濾，這取決于多種因素，包括實驗需求、血清質量和過濾技術等。以下是對此問題的詳細分析：一、血清過濾的優點去除雜質：過濾可以去除血清中的大顆粒雜質、微生物和細胞碎片等，從而提高血清的純凈度和安全性。保護細胞：在細胞培養過程中，雜質可能會對細胞造成損傷或污染。通過過濾去除這些雜質，可以保護細胞免受傷害，提高細胞的生長率和存活率。標準化實驗：過濾后的血清具有更高的一致性...
德克薩斯大學西南醫學中心研究人員的一項新研究表明，轉移RNA （tRNA）是一種以讀取構建蛋白指令而聞名的遺傳分子，在調節這些指令在細胞中持續的時間方面也起著關鍵作用。發表在《Science》雜志上的這一發現，擴大了對信使RNA （mRNA）降解時間的理解，信使RNA是控制基因活動的重要機制，最終可能有可能導致肥胖、癌癥和其他健康狀況的新療法。“我們的工作揭示了tRNA在控制mRNA穩定性和...
細胞支原體污染和細菌污染在細胞培養中都是常見的污染類型，但兩者之間存在明顯的區別。以下是對這兩種污染類型的詳細對比：一、污染特征污染類型肉眼觀察顯微鏡下觀察培養基變化生長影響支原體污染無明顯變化不可見（需特殊檢測）無明顯渾濁生長緩慢，狀態變差細菌污染培養基渾濁（4-6小時后）黑色細沙狀或大量黑點，菌體持續游動亮黃色渾濁生長受抑制，形態改變 二、污染來源支原體污染：支原體污染通常來源于污染的血...
mRNA（信使RNA）和質粒載體都是生物學中重要的分子，它們在結構和功能上有所不同，以下是兩者的詳細對比：一、mRNA定義：mRNA，全稱為Messenger RNA，即信使RNA，是由DNA的一條鏈作為模板轉錄而來的，攜帶遺傳信息并能指導蛋白質合成的一類單鏈核糖核酸。功能與角色：mRNA在生物體內扮演著傳遞遺傳信息的角色。當DNA分子中的基因被轉錄成mRNA后，mRNA就攜帶了與DNA分子...
細菌污染和黑膠蟲污染在細胞培養中都是常見的問題，但兩者之間存在明顯的區別。以下是兩者的主要差異：一、污染來源與特征細菌污染：來源：主要來源于實驗室環境、實驗人員、實驗服、實驗耗材、共用試劑等。在細胞培養過程中，即使添加雙抗，也可能因操作不慎而引起污染。特征：污染后培養基通常在1~2天后會出現渾濁、PH下降變黃。污染初期培養基肉眼觀察無明顯改變，只有在倒置顯微鏡下仔細觀察才能發現細菌。細菌污染...
細胞轉染是將外源分子如DNA、RNA等導入真核細胞的技術，其目的主要是改變細胞的基因型或表型能力，以研究和控制真核細胞的基因功能。具體來說，細胞轉染的目的可以歸納為以下幾點：基因表達：通過使用質粒載體或mRNA在培養細胞（或動物模型）中表達目的蛋白。利用真核細胞中的蛋白表達可以生成經過適當折疊和翻譯后修飾的重組蛋白。將帶有可檢測的標記物及其他修飾的蛋白質導入細胞，可用于啟動子和增強子序列或蛋...
化學蛋白質組學是一種重要的技術，可用于可視化、分離或操縱內源性未知蛋白質組。通過共價探針的方法，化學蛋白質組學可以用來篩選和發現潛在的藥物靶點，或者識別并調節蛋白質。近年來，利用六價硫官能團，如磺酰氟（-SO2F）、氧磺酰氟（-OSO2F）和磺亞胺酰氟（SAF）等硫中心的親電性，并基于第二代“點擊化學”—硫氟交換反應（SuFEx），與蛋白質中的親核性殘基，如半胱氨酸或賴氨酸等，發生共價連接，...
支原體（mycoplasma）是目前已知的最小原核微生物。無細胞壁結構，導致常用抗生素（青霉素、鏈霉素等）對支原體無效；體積小（0.1~0.3 μm），能通過 0.22 μm 濾膜，因此不能使用常規過濾方式去除。支原體通常散落在環境中，吸附在細胞表面導致細胞被支原體污染。細胞被支原體污染一般難以察覺，但支原體污染會導致細胞內DNA、RNA 以及蛋白質表達發生改變，對實驗結果會造成嚴重影響。研...
QPCR（Quantitative Real-time PCR，實時熒光定量PCR）檢測步驟中需要注意的要點主要包括以下幾個方面：一、實驗前的準備實驗室清潔與消毒：每天早上到達實驗室時，應開啟超凈工作臺的紫外線燈照射15~20分鐘進行消毒。同時，實驗過程中需要保持實驗室的清潔，避免攜帶實驗以外物品進入實驗室。個人防護：在超凈臺前做實驗時，需要佩戴干凈的橡膠手套或一次性薄膜手套，進行RNA抽提...
最近發表在《Nature Biotechnology》雜志上的一項報告探究了一種新的、能夠“定向進化”出具有增強轉導能力和生產能力的工程病毒樣顆粒（eVLP）的系統。突破性定向進化系統促進病毒樣顆粒進行更安全、更有效的基因編輯，為下一代治療創新提供了強大的工具。什么是eVLP ？在體外和體內有效和安全地將大分子輸送到特定細胞中的能力，對于各種新興的治療方式至關重要。目前主流的遞送載體包括腺相...
核酸檢測作為現代醫學診斷的重要手段，其準確性和可靠性直接關系到臨床決策的合理性。然而，在實際操作中，核酸檢測實驗室卻常常面臨核酸交叉污染的問題，這不僅影響了檢測結果的準確性，還可能對醫療安全造成潛在威脅。那么，為何核酸檢測實驗室容易發生核酸交叉污染呢？樣本采集、運輸和處理過程中的操作不規范是導致核酸交叉污染的主要原因之一。在樣本采集過程中，如果采樣人員未嚴格遵循無菌操作原則，或者使用同一把采...
檢測細胞是否為支原體污染，可以采用多種方法，以下是幾種常用的檢測方法：一、試劑盒檢測法目前已有專門用于支原體檢測的試劑盒，這些試劑盒通常基于特定的生化反應或免疫反應原理，能夠準確、快速地檢測出細胞中的支原體污染。使用時，只需按照試劑盒的說明書進行操作，即可得出檢測結果。二、觀察細胞形態和生長特征支原體污染嚴重時，可引起細胞生長減慢、培養基pH變酸、細胞病變等特征。通過觀察細胞的形態和生長特征...
在科研實驗中，PCR檢測支原體實驗的假陽性情況是一個需要關注的問題。假陽性結果的出現，意味著在實際不存在支原體的情況下，PCR檢測卻產生了陽性結果，這可能會對實驗結果產生誤導。以下是對科研實驗中PCR檢測支原體假陽性情況的詳細分析：一、假陽性原因 標本污染：在采集、運輸或處理標本的過程中，如果受到外界細菌、真菌等污染，可能會影響檢測結果，導致假陽性。容器污染：收集樣本的容器被污染，或樣本放置...
